甘草中甘草苷的含量測(cè)定

Gancao

GLYCYRRHIZAERADIXETRHIZOMA
本品為豆科植物甘草(GlycyrrhizauralensisFisch.、脹果甘草GlycyrrhizainflataBat.或光果甘草GlycyrrhizaglabralL.的干燥根和根莖。春、秋二季采挖，除去須根，曬干。

【性狀】甘草根呈圓柱形，長(zhǎng)25～100cm，直徑0.6～3.5cm。外皮松緊不一。表面紅棕色或灰棕色，具顯著的縱皺紋、溝紋、皮孔及稀疏的細(xì)根痕。質(zhì)堅(jiān)實(shí)，斷面略顯纖維性，
黃白色，粉性，形成層環(huán)明顯，射線(xiàn)放射狀，有的有裂隙。根莖呈圓柱形，表面有芽痕，斷面中部有髓。氣微，味甜而特殊。
脹果甘草根和根莖木質(zhì)粗壯，有的分枝，外皮粗糙，多灰棕色或灰褐色。質(zhì)堅(jiān)硬，木質(zhì)纖維多，粉性小。根莖不定芽多而粗大。
光果甘草根和根莖質(zhì)地較堅(jiān)實(shí)，有的分枝，外皮不粗糙，多灰棕色，皮孔細(xì)而不明顯。

【鑒別】(1)本品橫切面：木栓層為數(shù)列棕色細(xì)胞。栓內(nèi)層較窄。韌皮部射線(xiàn)寬廣，多彎曲，?，F(xiàn)裂隙；纖維多成束，非木化或微木化，周?chē)”诩?xì)胞常含草酸鈣方晶；篩管群常因壓縮而變形。束內(nèi)形成層明顯。木質(zhì)部射線(xiàn)寬3～5列細(xì)胞；導(dǎo)管較多，直徑約至160μm；木纖維成束，周?chē)”诩?xì)胞亦含草酸鈣方晶。根中心無(wú)髓；根莖中心有髓。
粉末淡棕黃色。纖維成束，直徑8～14μm，壁厚，微木化，周?chē)”诩?xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維。草酸鈣方晶多見(jiàn)。具緣紋孔導(dǎo)管較大，稀有網(wǎng)紋導(dǎo)管。木栓細(xì)胞紅棕色，多角形，微木化。
(2)取本品粉末1g，加乙醚40ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，棄去醚液，藥渣加甲醇30ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗滌3次，棄去水液，正丁醇液蒸于，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取甘草酸單銨鹽對(duì)照品，加甲醇制成每lml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照《薄層色譜法檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序》(附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各l～2μl，分別點(diǎn)于同一用1％氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯一甲酸一冰醋酸一水(15：l：1：2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴
以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的
位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。

【檢查】水分不得過(guò)12.0％(附錄ⅨH第一法)。
總灰分不得過(guò)7.0％(附錄ⅨK)。
酸不溶性灰分不得過(guò)2.0％(附錄ⅨK)。
重金屬及有害元素照鉛、鎘、砷、汞、銅測(cè)定法(附錄ⅨB原子吸收分光光度法或電感耦合等離子體質(zhì)譜法)測(cè)定，鉛不得過(guò)百萬(wàn)分之五；鎘不得過(guò)千萬(wàn)分之三；砷不得過(guò)百萬(wàn)分之二；汞不得過(guò)千萬(wàn)分之二；銅不得過(guò)百萬(wàn)分之二十。
有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量照農(nóng)藥殘留量測(cè)定法(附錄ⅨQ有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥殘留量測(cè)定)測(cè)定，六六六(總BHC)不得過(guò)千萬(wàn)分之二；滴滴涕(總DDT)不得過(guò)千萬(wàn)分之二；五氯硝基苯(PCNB)不得過(guò)千萬(wàn)分之一。

【含量測(cè)定】照《高效液相色譜法檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序》測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以0.05％磷酸溶液為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為237nm。理論
板數(shù)按甘草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。
時(shí)間（分鐘）流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）
0~8        19                 81
8~35        19~50        81~50
35~36      50~100      50~0
36~40       100~19     0~81
對(duì)照品溶液的制備取甘草苷對(duì)照品、甘草酸銨對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加70％乙醇分別制成每1ml含甘草苷20μg、甘草酸銨0.2mg的溶液，即得(甘草酸重量一甘草酸銨重量／1.0207)。
供試品溶液的制備取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約O.2g，精
密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％乙醇100ml，密塞，稱(chēng)
定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30分鐘，放冷，再
稱(chēng)定重量，用70％乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾
液，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各
10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品按干燥品計(jì)算，含甘草苷(C21H22O9)不得少于0.50％，甘草酸(C42H62O16)不得少于2.0％。